利用蛋白穩(wěn)定分析儀“美國(guó)Uncle/Unit”發(fā)表的高影響因子參考文獻(xiàn)

高通量多功能蛋白穩(wěn)定性分析儀Unit/Uncle,，是得到蛋白分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,、聚集穩(wěn)定性,、膠體分散穩(wěn)定性等多種類(lèi)型數(shù)據(jù)的設(shè)備。該設(shè)備既能使用經(jīng)典方法處理數(shù)據(jù),，又新增多種分析模式,；既可獲得單一類(lèi)型數(shù)據(jù)，又可對(duì)多種類(lèi)型數(shù)據(jù)同時(shí)測(cè)定整合分析,；既保證了數(shù)據(jù)質(zhì)量,，又實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)種類(lèi)和通量；并且樣品用量少,，操作簡(jiǎn)單快捷,，更能夠解決蛋白樣品數(shù)據(jù)獲得過(guò)程中的問(wèn)題。以此近期多篇利用該設(shè)備得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果高質(zhì)量文獻(xiàn)發(fā)表,。

2017年,，James I. Austerberry 等利用Unchained蛋白穩(wěn)定性分析儀Unit/Uncle在European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 上發(fā)表題為The Effect of Charge Mutations on the Stability and Aggregation of a Human Single Chain Fv Fragment的文章。該研究發(fā)現(xiàn),，盡管發(fā)生了精氨酸或賴(lài)氨酸富集的突變體都會(huì)發(fā)生相似的蛋白間的天然交聯(lián),，但聚集趨勢(shì)會(huì)因前者的富集增強(qiáng)，因后者減弱,，這為證明賴(lài)氨酸在一定條件下可抑制部分折疊的位點(diǎn)間的互作提供了證據(jù),。過(guò)充突變體遵循已有的基礎(chǔ)蛋白在酸性環(huán)境下的規(guī)律，即過(guò)量的凈電荷會(huì)降低結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,，增加成核速率,，但相反地，由于分子間電荷斥力增加,，會(huì)減小了聚集體增長(zhǎng)速率,。該結(jié)果果突出了使用構(gòu)象穩(wěn)定性和天然態(tài)蛋白間相互作用作為聚集特性預(yù)測(cè)指標(biāo)的局限性，并為如何構(gòu)建穩(wěn)定的荷電突變提供了指導(dǎo),。

2017年,，Josefine Morgenstern等利用Unchained蛋白穩(wěn)定性分析儀Unit/Uncle在International Journal of Pharmaceutics上發(fā)表題為Effect of PEG Molecular Weight and PEGylation Degree on the Physical Stability of PEGylated Lysozyme PEG的文章。在制藥,、生物技術(shù)應(yīng)用時(shí),，生產(chǎn)、純化,、配制和儲(chǔ)存蛋白過(guò)程中所面對(duì)的溶液條件是不利于其穩(wěn)定的,。這些有害的條件包括極端的pH值變化，高離子濃度或高溫,。這些促進(jìn)蛋白質(zhì)構(gòu)象和聚集狀態(tài)發(fā)生非預(yù)想變化的主要影響因素的表征,，以及對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的操縱和選擇性控制對(duì)生物制藥的研究和過(guò)程的發(fā)展至關(guān)重要。在這種情況下,，聚乙二醇(PEG)以共價(jià)鍵連接到蛋白質(zhì)是一種有價(jià)值的改善蛋白質(zhì)物理化學(xué)性質(zhì)的策略,。本文研究了聚乙二醇分子量和聚乙二醇化度對(duì)聚乙二醇溶菌酶物理穩(wěn)定性的影響,。并通過(guò)對(duì)溶菌酶進(jìn)行聚乙二醇處理，使蛋白質(zhì)的溶解度增加了11倍以上,。

2016年Kai Baumgartner等利用Unchained蛋白穩(wěn)定性分析儀Unit/Uncle在Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 上發(fā)表題為Prediction of Salt Effects on Protein Phase Behavior by HIC Retention and Thermal Stability 的文章,。在生物制藥業(yè)，了解和確保每個(gè)步驟中正確的蛋白相狀態(tài)被作為關(guān)鍵質(zhì)量屬性,。不需要的蛋白質(zhì)沉淀或結(jié)晶會(huì)導(dǎo)致柱,、管或過(guò)濾器堵塞。在配方中,，當(dāng)注射到病人體內(nèi)時(shí)，聚集物的形成甚至是致命的,。典型的說(shuō)明蛋白質(zhì)性狀的方法是蛋白質(zhì)相圖的產(chǎn)生,。通常，蛋白質(zhì)相行為依賴(lài)于蛋白質(zhì)和沉淀劑濃度,。盡管使用高通量的方法來(lái)生成相圖,，但是達(dá)到平衡所需的時(shí)間是瓶頸。現(xiàn)有一種更快的方法來(lái)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)相行為,。在這項(xiàng)研究中,，疏水相互作用色譜滯留時(shí)間與晶體大小和形式相關(guān)。使用OpTIM®2系統(tǒng)的高通量熱穩(wěn)定性測(cè)量值（融化和聚集溫度）成功地與葡萄糖異構(gòu)酶穩(wěn)定性關(guān)聯(lián)上了,。通過(guò)疏水相互作用色譜和熱穩(wěn)定性測(cè)定,，成功地預(yù)測(cè)了不同鹽在特定pH范圍內(nèi)的葡萄糖異構(gòu)酶構(gòu)象和膠體穩(wěn)定性。

2016年,，Robbert Q. Kim 等利用Unchained蛋白穩(wěn)定性分析儀Unit/Uncle在Journal of Structural Biology上發(fā)表題為Structure of USP7 Catalytic Domain and Three Ubl-domains Reveals a Connector α-helix with Regulatory Role USP7的文章,。泛素化是細(xì)胞途徑中的一個(gè)重要信號(hào)，通過(guò)降解,、重定位或絡(luò)合物形成改變目標(biāo)蛋白的命運(yùn),。這些信號(hào)通過(guò)去泛素化酶(DUBs)來(lái)平衡，去泛素化與特定蛋白的泛素化過(guò)程相反,。因?yàn)榉核鼗緩绞侵陵P(guān)重要的,，所以DUB的活性通常被嚴(yán)密控制。USP7是一個(gè)表達(dá)量非常高的DUB,，具有多重靶點(diǎn),，在包括DNA調(diào)控、p53應(yīng)激反應(yīng)和體內(nèi)蛋白回收等不同的途徑中扮演多種角色,。全長(zhǎng)的USP7在非活動(dòng)狀態(tài)和活動(dòng)狀態(tài)之間進(jìn)行切換,，通過(guò)定位在c端HUBL域中的5個(gè)Ubl折疊進(jìn)行調(diào)整?；钚詰B(tài)需要后兩個(gè)Ubls (USP745)和催化域(USP7CD)之間的相互作用,，這可以通過(guò)與GMPS相互作用的USP7 (USP7123)的前三個(gè)Ubl域的變構(gòu)相互作用來(lái)促進(jìn),。本文研究了USP7狀態(tài)之間的轉(zhuǎn)換。提供了USP7CD123的晶體結(jié)構(gòu),，并表明CD和Ubl123通過(guò)一個(gè)擴(kuò)展的帶電荷的螺旋連接在一起,。使用突變分析來(lái)確定這種“連接螺旋”的電荷和剛度對(duì)于完整的USP7活性是否重要。